斑马鱼行为实验应该如何去做啊需要注意什么
行为研究
鱼类行为轨迹的跟踪和量化
研究中描述的所有鱼类行为测试都用摄像机(SONYHandycam,FDR-AX60,Japan)进行了录像，并使用动物行为跟踪软件VisuTrack动物行为分析软件进行了离线分析。
1、Openfieldtest（旷场实验）
为了探索运动和自发活动，我们描述了鱼的行为当它们在Plexiglasopen-fieldapparatus（装置、设备、仪器）中自由探索时（直径20厘米；高10厘米）（图1a）。鱼分别转移到鱼缸中10分钟；最后8分钟内的轨迹由顶部视图摄像机记录下来进行分析。在实验过程中，测量了受试者在中心和外围区域花费的时间、移动的总距离(cm)和平均速度(cm/s)。
2、Noveltanktest（新型水槽测试）
本发明公开了一种透明的1.5升梯形水槽检测装置（15.2×27.9×22.5×7.2cm;高×上底×下底×宽）（图1c）。鱼在早上(9:00)或晚上(21:00)被放在这个水槽里10分钟。最后8分钟记录他们的行为轨迹。为了进行轨迹分析，新型水槽实际上被分为三个水平段(上、中、下)。
图1.openfieldtank和noveltank的位置选择。（a）敞开式水槽示意图(顶部)。单个空间实际上被一个内圆分成两个部分。(b)游程(cm)，平均速度(cm/s)，以及斑马鱼、medaka和中国鲦鱼在openfieldtank的“中心”和“外围”区域所花费的时间(s)。(c)新型水槽(侧面)示意图。(d)鱼在上午(9:00)和晚上(21:00)在不同区域所花费的时间(%)。
3、Novelobjecttest
每条鱼分别转入透明试验池(25×20×15cm，长×宽×高);每个容器包含一个新对象(蓝色塑料立方体，3×3×1cm，长×宽×高)，以确定其对新颖性的响应(图3a)。温热水(25±1°C,pH7.2-7.6，硬度44.0-61.0mgCaCO3/L)置于测试槽中使水深达到10厘米。经过5分钟的适应期后，将新对象放置在鱼缸的一角，让鱼自由探索8分钟。最后6分钟记录他们的行为轨迹。为了便于分析，试验池实际上分为两部分(新对象区和无对象区)(图3a)。我们分析了在虚拟分割的水槽两部分所走过的总距离(cm)和所花费的时间(s)。
图3.Novelobjectrecognitionandsocialinteraction.(a)新型目标识别试验箱示意图(顶部)。沿对角线分为两个部分，包括“新对象区”和“无对象区”。(b)在6钟的探索过程中，当一个新物体被放入场地的一个角落时的距离分布，距离（cm）。(c)及所花时间（s）。(d)在“新对象区”和“无对象区”。
4、社交
对鱼进行社交测试所需的测试设备主要包括一个透明的Plexiglas十字槽(50×50×10cm，长×宽×高)（图3e）。水槽的每只臂都被一个Plexiglas墙隔开。在水槽中，随机选择的一个末端腔室(其他三个腔室是空地)和中心腔室各包含一个相同处理的个体。转移后，对鱼进行2分钟的适应，记录其行为8分钟。数据分析中，计算出鱼在其同伴(社交圈)附近区域的时间，作为对同种视觉刺激的响应。
图3(e)社交测试池示意图(上)。(f)在“社交区”内的时间。热图表示的是鱼经过8分钟的社交活动后，在十字槽内的空间偏好。
5、适应黑暗或噪音刺激
open-fieldtank被用来评估鱼对黑暗或噪音刺激的惊吓反应。黑暗和噪声刺激实验分别进行。简单地说，连续的黑暗刺激(5分钟周期)通过放置在透明开放装置底部的多个自动开/关白色LEDs阵列来传递。此外，用一个塑料立方体(15×9×0.5cm，长×宽×高)将其提升到cm的高度，用手将其释放到坚硬的平面上，产生一系列的噪声刺激(图5a、b)。用了一个俯视图照相机来捕捉鱼的动作。
图5.三种鱼类对噪声刺激的适应反应。(a)噪声产生(侧面)示意图。（b）噪声刺激计划。
6、空间学习与记忆
空间学习记忆是外显记忆的一种长期存储形式。和哺乳动物一样，越来越多的证据表明硬骨鱼也具有学习和记忆的特性和神经基础。利用隐藏的的学习设备对鱼类的空间学习和记忆能力进行了评价和测试。该仪器与以前报道所描述的相同，由启动室、奖励室和连接这两个室的两个隧道组成。在训练或测试中，迷宫被注入10厘米深的水，水的温度与实验水箱的温度相同。两周的学习训练和最后的记忆评估基本上是像其他地方描述的那样进行的。空间学习训练从暴露前7天开始，暴露后7天结束。每天进行一次训练，每组10条鱼放入启动室，30秒后释放这些鱼，在迷宫中探索30分钟(左边或右边的通道都是打开的)。最后的记忆评估为10分钟(每组一个)。在本研究中，我们计算了奖励室中鱼的总数和鱼在不同片段中所花费的时间。
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