基因编辑技术与动物模型构建研讨会3月1
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CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长工夫抉择压力中造成的一种适应性免疫警备，可用来灵验抵挡病毒及外源DNA的侵犯。CRISPR的TypeII曾经被精深用于基因工程，它包罗Cas9，crRNA和tracrRNA，此中crRNA含有可以辨别20bp的靶向互补序列。Cas9，crRNA和tracrRNA构成复合体，辨别并联结crRNA互补的序列，而后解开DNA双链，Cas9中的HNH活性位点剪切crRNA的互补DNA链，RuvC活性位点剪切非互补链，终究致使DNA的双链断裂（DSB），从而实行基因的敲除和插入。
方今，CRISPR/Cas9系统曾经精深用于对哺乳动物细胞，细菌，斑马鱼，小鼠，猪，猴的基因编纂。本进修班将详细解说CRISPR/Cas9基因编纂器材旨趣，操纵过程，理论联结尝试，将让众人详细知道到详细怎么行使CRISPR/Cas9技艺建树基因润色动物等。进修班将为关连科研处事人员和意思嗜好者供给了很好的培训资本。
李博士，副探索员。年博士卒业于德国慕尼黑产业大学大型动物生物技艺探索所,获极甲第声誉学位（MAGNACUMLAUDE）。要紧探索周围为基因编纂动物模子建树与运用探索，胜利建树过ROSA26基因定点敲入大动物模子、Kras基因点渐变大动物模子、小鼠基因编纂肝癌模子等，在基因编纂探索周围积攒了较好的探索学问配景，善于对该周围学问解说和教授，解说深入浅出、逻辑性强，并可针对性对基因编纂本质操纵题目举行回答与启迪，以期更好地让基因编纂器材运用于您的处事和进修探索中。方今已颁发论文22篇，此中第一做家/并列通信做家SCI论文12篇，以第一首创人请求国度首创专利2项。掌管实行国度果然科学基金等项目6项，赢得上海市测验动物学会年度学会处事先进集体、年“ICLAS-CALAS国际青年奖”、年第三十届上海市特等首创采用赛银奖、年上海市能人进取资本等。1、控制基因打靶与基因编纂技艺(ZNF,TALENs,CRISPR/Cas9)，可以策画sgRNA靶点，建树CRISPR/Cas9质粒，用于基因敲除和敲入。
2、控制CRISPR/Cas9质粒转染法子,阳性细胞克隆挑选法子编制，基因编纂细胞系的建树，基因润色状况剖析法子。
3、控制CRISPR/Cas9脱靶造成的缘故，脱靶探测法子，升高脱靶题目的法子
4、控制CRISPR/Cas9的本质运用，建树动物模子，对建树基因润色小鼠和基因润色大动物（猪）有较深入知道。
5、控制新基因编纂器材，如：Cpf1,C2C2,baseediting等。
6、控制基因编纂探索周围前沿进取，基因编纂器材的拓展运用、临床运用等，造成行使基因编纂器材联结本身探索实质等科学思想。
7、Baseeditor操纵法子。
8、基因编纂器材用于探测新式冠状病毒、基因编纂器材有或者运用于新冠医治等运用的讲解与拓展
基因编纂技艺与动物模子建树商量会日程
日期
工夫
主旨
详细实质
第一天上昼
9:00-10:30
基因润色技艺简介（一）
基因打靶与基因编纂技艺（ZNF,TALENs，CRISPR/Cas9）讲解
基因编纂、基因润色、基因打靶、转基因、基因敲除、基因敲入等专科周围观念梳理
CRISPR/Cas9结讲和特性
怎么操纵CRISPR/Cas9系统对特定基因举行敲除或定点插入（详细法子环节）
拓展怎么抬高定点敲入效率等学问
10:30-10:45
暂息
10:45-12:00
基因润色技艺简介（二）
基因编纂器材Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14的组织、特性、处事旨趣
怎么操纵Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14系统举行编纂
Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14与Cas9的较量
Cas9、Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14的运用和技艺预测
上昼现场答疑
12:00-13:30
午餐及午休
第一天下昼
13:30-14:00
CRISPR（sgRNA）策画法子和关连网站讲解
sgRNA策画法子和关连网站讲解
CRISPR（sgRNA）的在线策画（在线互动策画演练）
14:00-15:30
基因编纂测验详细操纵
gRNAoligos模板退火
退火gRNA与线性化CRISPR/Cas9载体衔接
衔接产品转折到大肠杆菌（DH5α），转折产品涂板造就，CRISPR/Cas9重组仔细菌克隆挑取，张大化造就，判决阳性克隆
细胞转染（Electroperation，Nuclefection，Nanofection，X-fection）等讲解与运用拓展
单细胞克隆挑选（有限稀释法，滤纸法、环法、流式分选法等）法子讲解与运用拓展
15:30-15:45
15:45-17:00
行使CRISPR/Cas9技艺编纂动物细胞系
CRISPR/Cas9质粒细胞转染法子
阳性细胞克隆挑选，基因润色基因组DNA模板马上制备
目标靶基因的基因组DNA片断的PCR扩增，电泳探测PCR产品
PCR产品退火变性，T7E1酶切，电泳判决基因润色状况
17:00-17:30
CRISPR/Cas9关键点归纳、概括、拓展
基因编纂关键学问点概括、归纳和提炼
CRISPR/Cas9技艺运用拓展（如CAB基因敲入法子等讲解）
第二天上昼
9:00-10:30
行使基因编纂技艺建树基因敲除或敲入小鼠
基因工程小鼠的详细分类与较量
小鼠受精卵分散和造就
CRISPR/Cas9系统显微打针到小鼠受精卵
受精卵显微打针后回输到代孕母鼠体内
PCR和T7E1剖析和判决基因敲除小鼠（Founder）
基因敲除小鼠基因敲除状况剖析
CRISPR/Cas9建树基因敲除小鼠详细测验过程概括和归纳
10:30-10:45
暂息
10:45-11:15
行使基因编纂技艺建树大动物模子
以大动物猪为例，举行详细讲解基因编纂技艺在大动物模子中的运用
行使CRISPR/Cas9建树基因润色大型动物（猪）过程
基因润色大型动物上风
行使CRISPR/Cas9建树基因润色大动物（猪）模子讲解
11:15-12:00
行使基因编纂技艺建树动物模子的详细案例讲解
行使CRISPR/Cas9建树基因润色小鼠法子与关连基因润色小鼠模子
行使CRISPR/Cas9建树基因润色大动物（猪、猴）法子与关连基因润色大动物模子
拓展基因编纂技艺在别的物种中的运用
拓展基因编纂技艺在别的物种中的运用
12:00-13:30
午餐及午休
第二天下昼
13:30-15:00
测验终于的点评与商议
CRISPR/Cas9载体建树商议
目标靶基因的基因组DNA片断的PCR扩增，电泳探测PCR产品终于商议
PCR产品T7E1酶切，电泳判决基因润色状况终于商议
Sanger测序判决基因编纂终于：CRISPR/Cas9质粒阳性转折子测序终于确认；Sanger测序赏玩基因编纂状况；怎么从测序色谱图中赏玩靶向渐变等位基因型
15:00-15:30
CRISPR/Cas9脱靶题目剖析
脱靶造成的缘故
脱靶探测法子
升高脱靶题目的法子
15:30-15:45
15:45-16:30
基因编纂周围进取大梳理与通盘拓展
基因编纂技艺的运用拓展讲解：SHERLOCK-V1、SHERLOCK-V2等运用于探测方面的拓展，Baseediting
联结当下新式冠状病毒热门，基因编纂器材用于探测新式冠状病毒、基因编纂器材有或者运用于新冠医治等运用的讲解与拓展
Cas系列渐变体的讲解与运用
基因编纂的拓展运用（如运用于杜氏养分肌不良归纳征、白内障、毁灭蚊子、植物中的运用、细菌中的运用等）
基因编纂器材的伦理题目于商议
会务花费：线上：元/人
会议工夫：年3月12-13日
会议处所：线上：腾讯会议网络会议室
主理方：上海循掘生物科技中间
付款方法：
A：银行转账
账户称呼：上海循掘生物科技中间账户号：
开户行：华夏工商银行上海市永泰路支行
B：支出宝转账
收款人：yonghong
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