斑马鱼行为实验专题丨8新型水箱测试N

新型水箱测试（NovalTankTest，NTT）涉及将斑马鱼随机分配到对照组和模型组，并将它们分别养殖在10升的独立水箱中，设定水温为28℃。在同一环境条件下，斑马鱼首先进行一周的适应性饲养，随后接受为期五周的慢性不可预知应激（CUS）处理。NTT是一个被广泛采用的实验程序，主要用于评估斑马鱼向水箱顶部的运动和探索行为，作为其对新环境的焦虑样反应的量化指标，这对于评估斑马鱼的抑郁模型十分重要。

一、实验步骤

在安排测试当天，需要将斑马鱼的水箱移至旁边的测试室。为了减少转移对它们的影响，让斑马鱼在行为评估前至少适应30分钟。避免因抢食造成的竞争，斑马鱼在行为测试前需经过禁食处理，并且测试应在10:00至17:00之间完成。确保测试期间水温保持稳定并定时更换水。斑马鱼初次被放入新水箱时倾向于在底部游动，它们从底部移动并开始探索周围环境所需的时间差，用作评估其焦虑水平的一个指标。NTT设备由一个玻璃水缸（26cm长×5cm宽×20cm高）组成，并在外侧用虚线标记分成两个相等的虚拟水平部分，分为顶部和底部部分。在测试日，单独使用渔网将斑马鱼转移到测试容器，并通过位于容器前方的电脑摄像头记录它们在容器内自由游动的5分钟视频。完成实验后，将这些视频随机分组，并由两位研究人员A和B在不知道视频分组情况的前提下，观察并记录斑马鱼从底部向上探索的行为和它们的冻结行为。之后，将这些观察结果进行汇总和分析。

二、实验评估

NTT模仿了用于评估啮齿类动物焦虑和抑郁状况的经典测试，如旷场测试和高架十字迷宫测试，通过观察斑马鱼在水箱中的行为来评估其抑郁症状。在为期5分钟的测试中，研究人员记录了斑马鱼在水箱不同水层（底部或顶层）的活动，作为判断其抑郁程度的依据。斑马鱼偏好在底层游动和较少游向顶层被认为是抑郁行为的迹象。斑马鱼进入顶层的延迟时间、在顶层的静止（冻结）次数和持续时间的增加，都被解释为动物可能经历更严重的抑郁状态。此外，经历了五周慢性应激的斑马鱼展现出对顶层探索行为的减少，这包括游向顶部的次数减少、在顶部停留的时间缩短以及探索顶层的潜伏期延长，同时，这些应激后的斑马鱼在冻结频率和持续时间上也有显著增加。

暴露于五周的慢性不可预知应激后，会引起斑马鱼垂直方向探索行为的改变。与对照组相比，模型组的斑马鱼向顶部的探索行为减少，表现为游向顶部的探索潜伏期显著延长，游向顶部的次数以及时间显著减少。同时，模型组的斑马鱼表现出频繁的冻结僵化现象，即冻结僵化频率（Freezingfrequency）及冻结僵化持续时间（Freezingduration）显著增加。

转载请注明：http://www.abuoumao.com/hyls/9315.html