基因编辑技术与动物模型构建研讨会4月9
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CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长工夫取舍压力中构成的一种适应性免疫防备，可用来有用抵抗病毒及外源DNA的侵犯。CRISPR的TypeII曾经被精深用于基因工程，它包括Cas9，crRNA和tracrRNA，此中crRNA含有可以辨认20bp的靶向互补序列。Cas9，crRNA和tracrRNA构成复合体，辨认并连接crRNA互补的序列，尔后解开DNA双链，Cas9中的HNH活性位点剪切crRNA的互补DNA链，RuvC活性位点剪切非互补链，最后致使DNA的双链断裂（DSB），从而实行基因的敲除和插入。
当今，CRISPR/Cas9系统曾经精深用于对哺乳动物细胞，细菌，斑马鱼，小鼠，猪，猴的基因编纂。本研习班将详细解说CRISPR/Cas9基因编纂用具道理，职掌过程，理论连接践行，将让众人详细相识到详细怎样行使CRISPR/Cas9技艺建树基因润饰动物等。研习班将为关连科研做事人员和趣味嗜好者供应了很好的培训资本。
李博士，副协商员。年博士结业于德国慕尼黑产业大学大型动物生物技艺协商所,获极头等信誉学位（MAGNACUMLAUDE）。首要协商周围为基因编纂动物模子建树与运用协商，胜利建树过ROSA26基因定点敲入大动物模子、Kras基因点渐变大动物模子、小鼠基因编纂肝癌模子等，在基因编纂协商周围积攒了较好的协商学识后台，善于对该周围学识解说和教学，解说深入浅出、逻辑性强，并可针对性对基因编纂本质职掌题目举行回答与警示，以期更好地让基因编纂用具运用于您的做事和研习协商中。当今已颁发论文22篇，此中第一做家/并列通信做家SCI论文12篇，以第一创造人请求国度创造专利2项。垄断完结国度果然科学基金等项目6项，赢得上海市尝试动物学会年度学会做事先进小我、年“ICLAS-CALAS国际青年奖”、年第三十届上海市优异创造采用赛银奖、年上海市人材进步资本等。1、控制基因打靶与基因编纂技艺(ZNF,TALENs,CRISPR/Cas9)，可以策画sgRNA靶点，建树CRISPR/Cas9质粒，用于基因敲除和敲入。
2、控制CRISPR/Cas9质粒转染办法,阳性细胞克隆挑选办法体制，基因编纂细胞系的建树，基因润饰情景剖析办法。
3、控制CRISPR/Cas9脱靶构成的出处，脱靶探测办法，升高脱靶题目的办法
4、控制CRISPR/Cas9的本质运用，建树动物模子，对建树基因润饰小鼠和基因润饰大动物（猪）有较深入相识。
5、控制新基因编纂用具，如：Cpf1,C2C2,baseediting等。
6、控制基因编纂协商周围前沿进步，基因编纂用具的拓展运用、临床运用等，构成行使基因编纂用具连接自身协商实质等科学思惟。
7、Baseeditor哄骗办法。
8、基因编纂用具用于探测新式冠状病毒、基因编纂用具备或者运用于新冠调节等运用的引见与拓展
基因编纂技艺与动物模子建树研究会日程
日期
工夫
中心
详细实质
第一天上昼
9:00-10:30
基因润饰技艺简介（一）
基因打靶与基因编纂技艺（ZNF,TALENs，CRISPR/Cas9）引见
基因编纂、基因润饰、基因打靶、转基因、基因敲除、基因敲入等业余周围观念梳理
CRISPR/Cas9结讲和特征
怎样哄骗CRISPR/Cas9系统对特定基因举行敲除或定点插入（详细办法环节）
拓展怎样提升定点敲入效率等学识
10:30-10:45
停息
10:45-12:00
基因润饰技艺简介（二）
基因编纂用具Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14的机关、特征、做事道理
怎样哄骗Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14系统举行编纂
Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14与Cas9的对照
Cas9、Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14的运用和技艺瞻望
上昼现场答疑
12:00-13:30
午餐及午休
第一天下昼
13:30-14:00
CRISPR（sgRNA）策画办法和关连网站引见
sgRNA策画办法和关连网站引见
CRISPR（sgRNA）的在线策画（在线互动策画演练）
14:00-15:30
基因编纂尝试详细职掌
gRNAoligos模板退火
退火gRNA与线性化CRISPR/Cas9载体衔接
衔接产品变化到大肠杆菌（DH5α），变化产品涂板造就，CRISPR/Cas9重组仔细菌克隆挑取，张大化造就，判决阳性克隆
细胞转染（Electroperation，Nuclefection，Nanofection，X-fection）等引见与运用拓展
单细胞克隆挑选（有限稀释法，滤纸法、环法、流式分选法等）办法引见与运用拓展
15:30-15:45
15:45-17:00
行使CRISPR/Cas9技艺编纂动物细胞系
CRISPR/Cas9质粒细胞转染办法
阳性细胞克隆挑选，基因润饰基因组DNA模板马上制备
方针靶基因的基因组DNA片断的PCR扩增，电泳探测PCR产品
PCR产品退火变性，T7E1酶切，电泳判决基因润饰情景
17:00-17:30
CRISPR/Cas9关键点归纳、概括、拓展
基因编纂关键学识点概括、归纳和提炼
CRISPR/Cas9技艺运用拓展（如CAB基因敲入办法等引见）
第二天上昼
9:00-10:30
行使基因编纂技艺建树基因敲除或敲入小鼠
基因工程小鼠的详细分类与对照
小鼠受精卵离别和造就
CRISPR/Cas9系统显微打针到小鼠受精卵
受精卵显微打针后回输到代孕母鼠体内
PCR和T7E1剖析和判决基因敲除小鼠（Founder）
基因敲除小鼠基因敲除情景剖析
CRISPR/Cas9建树基因敲除小鼠详细尝试过程概括和归纳
10:30-10:45
停息
10:45-11:15
行使基因编纂技艺建树大动物模子
以大动物猪为例，举行详细引见基因编纂技艺在大动物模子中的运用
行使CRISPR/Cas9建树基因润饰大型动物（猪）过程
基因润饰大型动物上风
行使CRISPR/Cas9建树基因润饰大动物（猪）模子引见
11:15-12:00
行使基因编纂技艺建树动物模子的详细案例引见
行使CRISPR/Cas9建树基因润饰小鼠办法与关连基因润饰小鼠模子
行使CRISPR/Cas9建树基因润饰大动物（猪、猴）办法与关连基因润饰大动物模子
拓展基因编纂技艺在其余物种中的运用
拓展基因编纂技艺在其余物种中的运用
12:00-13:30
午餐及午休
第二天下昼
13:30-15:00
尝试了局的点评与议论
CRISPR/Cas9载体建树议论
方针靶基因的基因组DNA片断的PCR扩增，电泳探测PCR产品了局议论
PCR产品T7E1酶切，电泳判决基因润饰情景了局议论
Sanger测序判决基因编纂了局：CRISPR/Cas9质粒阳性变化子测序了局确认；Sanger测序浏览基因编纂情景；怎样从测序色谱图中浏览靶向渐变等位基因型
15:00-15:30
CRISPR/Cas9脱靶题目剖析
脱靶构成的出处
脱靶探测办法
升高脱靶题目的办法
15:30-15:45
15:45-16:30
基因编纂周围进步大梳理与通盘拓展
基因编纂技艺的运用拓展引见：SHERLOCK-V1、SHERLOCK-V2等运用于探测方面的拓展，Baseediting
连接当下新式冠状病毒热门，基因编纂用具用于探测新式冠状病毒、基因编纂用具备或者运用于新冠调节等运用的引见与拓展
Cas系列渐变体的引见与运用
基因编纂的拓展运用（如运用于杜氏养分肌不良归纳征、白内障、泯灭蚊子、植物中的运用、细菌中的运用等）
基因编纂用具的伦理题目于议论
会务花费：线上：元/人
会议工夫：年4月9-10日
会议场所：线上：腾讯会议网络会议室
垄断方：上海循掘生物科技核心
付款方法：
A：银行转账
账户称呼：上海循掘生物科技核心账户号：1064709016561
开户行：华夏工商银行上海市永泰路支行
B：支拨宝转账
收款人：yonghong
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